高中生物学经典实验中的同位素标记
一、什么是同位素标记法? 【概念】同位素可用于追踪物质的运行和变化规律。借助同位素原子以研究有机反应历程的方法。即同位素用于追踪物质运行和变化过程时,叫做示踪元素。用示踪元素标记的化合物,其化学性质不变。科学家通过追踪示踪元素标记的化合物,可以弄清化学反应的详细过程。这种科学研究方法叫做同位素标记法。同位素标记法也叫同位素示踪法。 【原理】具有相同质子数,不同中子数的同一元素的不同核素互为同位素。同位素可分为稳定同位素和放射性同位素。 1、稳定同位素:稳定同位素是指原子核结构稳定,不发生衰变的同位素,稳定同位素没有放射性,如:1H、 2H、15N、18O等。在实验或研究中如使用稳定同位素,不能采用自显影等技术来追踪同位素的去向,只能利用同位素的质量差,通过测量分子质量或离心技术来区别同位素。鲁宾和卡门就是用稳定性同位素18O分别标记H2O和CO2来研究光合作用过程中释放的氧气中O的来源。 2、放射性同位素:具有一定的半衰期,是不稳定的同位素。常用的有:14C、32P、35S、 3H等。利用放射性同位素能不断地放出特征射线的核物理性质,就可以用探测器随时追踪它在体内或体外的位置、数量及其转变等。放射性同位素和稳定性同位素都可作为示踪剂,但是,稳定性同位素作为示踪剂其灵敏度较低,可获得的种类少,价格较昂贵,其应用范围受到限制;而用放射性同位素作为示踪剂不仅灵敏度,测量方法简便易行,能准确地定量,准确地定位及符合所研究对象的生理条件等特点。 二、高中生物经典实验中的同位素标记 1、研究分泌蛋白的合成和分泌 :研究细胞器在分泌蛋白合成中的作用时,标记某一氨基酸如亮氨酸的3H,在一次性给予放射性标记的氨基酸的前提下,通过观察细胞中放射性物质在不同时间出现的位置,就可以明确地看出细胞器在分泌蛋白合成和运输中的作用。研究手段:观察放射性在不同细胞器中出现的时间,来观察不同细胞器在分泌蛋白中的作用。 2、研究光合作用中氧气的来源 :1939年,鲁宾和卡门用18O分别标记H2O和CO2,然后进行两组对比实验:一组提供H2O和C18O2,另一组提供H218O和CO2。在其他条件相同情况下,分析出第一组释放的氧气全部为O2,第二组全部为18O2,有力地证明了植物释放的O2来自于H2O而不是CO2。 3、研究光合作用中CO2中的碳原子转移途径:20世纪40年代美国生物学家卡尔文等把单细胞的小球藻短暂暴露在含14C的CO2里,然后把细胞磨碎,分析14C出现在哪些化合物中。经过10年努力终于探索出了光合作用的“三碳途径”——卡尔文循环。 4.噬菌体侵染细菌的实验:1952年,美国遗传学家赫尔希( A.D.Hershey,1908—1997)和他的助手蔡斯(M. C.Chase,1927——2003)以T2噬菌体为实验材料,利用放射性同位素标记技术。赫尔希和蔡斯首先在分别含有放射性同位素35S和放射性同位素32P的培养基中培养大肠杆菌,再用上述大肠杆菌培养T2噬菌体,得到蛋白质含有35S标记或DNA含有32P标记的噬菌体。然后,用35S或32P标记的T2噬菌体分别侵染未被标记的大肠杆菌,经过短时间的保温后,用搅拌器搅拌、离心。搅拌的目的是使吸附在细菌上的噬菌体与细菌分离,离心的目的是让上清液中析出质量较轻的T2噬菌休颗粒,而离心管的沉淀物中留下被侵染的大肠杆菌。离心后,检查上清液和沉淀物中的放射性物质发现:用35S标记的一组侵染实验,放射性同位素主要分布在上清液中;用32P标记的一组实验,放射性同位素主要分布在离心管的沉淀物中。 5、探究DNA分子半保留复制的特点1957年,美国科学家梅塞尔森和斯坦尔用含15N的培养基培养大肠杆菌,使之变成“重”细菌,再把它放在含14N的培养基中继续培养。在不同时间取样,并提取DNA进行密度梯度离心,根据轻重链浮力等的不同,就分出新生链和母链,这就证实了DNA复制的半保留性。



