微生物的实验室培养常见问题解答
1.什么叫培养基？琼脂是什么性质？有哪些作用？
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质
在常规培养条件下呈现固态
只起凝固作用，微生物不能利用
2.培养基的种类，按物理性质可分为哪些？他们各自有哪些作用？在实验室中最常用的培养基是哪种？
培养基按物理性质分为液体培养基和固体培养基
液体培养基：选择培养/扩大培养/富聚培养，工业生产菌种的大量繁殖（目的是增加目的菌的数量）
固体培养基：分离、鉴定、活菌计数和保藏菌种
3.培养基的种类，按用途可以分为哪些？请举例说明。
按用途分为选择培养基和鉴别培养基
选择培养基：①加入某种化学物质：a.加抗生素筛选出真菌（如酵母菌、霉菌）和耐药菌
b.加高浓度食盐筛选出金黄色葡萄球菌（耐盐突变体细菌）
②改变培养基中营养成分：a.缺乏氮源时筛选出固氮微生物
b.缺乏碳源时筛选出自养微生物
c.以石油为唯一碳源时筛选出分解石油的微生物
d.以纤维素为唯一碳源时筛选出分解纤维素的微生物
e.以尿素为唯一氮源时筛选出分解尿素的微生物
③改变微生物培养条件：a.将培养基放在高温环境培养筛选出耐高温的微生物
b.用普通培养基在无氧条件下培养筛选出厌氧型和兼性厌氧型微生物
鉴别培养基：伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌（菌落呈现黑色）
4.培养基中配方成分主要有哪些？如何通过培养基的营养组成判断微生物的同化类型？
一般都含有水、碳源、氮源和无机盐
自养型微生物的培养基主要以无机营养为主；异养型微生物的培养基主要以有机营养为主
5.培养基在满足主要营养物质的基础上，还需要满足什么条件？
还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求
6.培养乳酸杆菌时，还需要在培养基中添加什么？培养细菌时的PH？培养霉菌呢？培养厌氧型微生物呢？
培养乳酸杆菌时添加维生素
培养细菌时将pH 调至中性或微碱性；培养霉菌时将 pH 调至酸性
培养厌氧微生物时要提供无氧的条件
7.牛肉膏和蛋白胨的功能是什么？主要能提供哪些营养物质？
功能：提供营养物质和能量
牛肉膏提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素、磷酸盐
蛋白胨提供的主要营养物质是碳源、氮源、维生素
8.获得纯净培养物的关键是？
防止外来杂菌的入侵
9.对实验操作的空间、操作者的衣着和手要进行什么操作？
消毒和灭菌
10.用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基要进行什么操作？
灭菌
11.实验操作应在什么附近进行？
酒精灯火焰附近进行
12.消毒和灭菌的定义分别是什么？实验室常用的消毒和灭菌的方法分别是什么？
消毒消毒：用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子
常用方法：煮沸消毒法、牛奶用巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法
灭菌灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
常用方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
13.为什么常用70%酒精作为消毒剂？需要灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌的分别有哪些？
70%的酒精杀菌效果最好，浓度过高，会使菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱
灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口
干热灭菌：培养皿、试管、吸管等耐高温、需保持干燥的物品
高压蒸汽灭菌：如培养基、无菌水
14.培养基丢弃之前要做什么操作？为什么？
灭菌防止污染环境或感染操作者
15.高压蒸汽灭菌为达到良好的灭菌效果，压力为多少？温度为多少？维持多长时间？高压蒸汽灭菌锅的正确使用方法是什么？
100千帕，121摄氏度，15-30分钟
16.高压蒸汽灭菌中，把锅内的水加热煮沸的原因是什么？不这样做会引起什么结果？
将锅内的冷空气彻底排除，不然会导致温度达不到121摄氏度
17.紫外线消毒在照射前需要喷洒什么可以加强消毒效果？
石炭酸或煤酚皂等消毒液
18.培养牛肉膏蛋白胨培养基的流程是什么？如果要调节PH，需在哪步操作之前？
计算→称量→溶化→(调节 pH)→灭菌→倒平板 先调PH-分装-后灭菌
19.为什么称取时动作要迅速？
牛肉膏、蛋白胨都易吸潮
20.溶化过程中不断用玻璃棒搅拌的作用是什么？
防止琼脂糊底而导致烧杯破裂
21.培养基灭菌后为什么要冷却到50摄氏度左右才能用来倒平板？用什么来估计培养基的温度？
温度过高烫手，温度过低琼脂会凝固而倒不出
用手摸不烫手温度大约在50摄氏度左右
22.为什么要在酒精灯火焰附近进行倒平板？为什么锥形瓶瓶口要通过火焰？
营造一个无菌区，防止杂菌侵入污染
通过灼烧灭菌防止外瓶口微生物污染培养物
23.如果不小心将培养基溅到皿盖和皿底之间的部位，这个培养基还能用来培养微生物吗？为什么？
不能，空气中的微生物可能皿盖与皿底之间的培养基上滋生
24.倒平板操作中，平板冷却凝固后还需要如何操作？为什么？
平板冷却凝固后需倒置
目的：①防止皿盖上的冷凝水落入培养基中造成污染；②减少水分挥发
25.微生物的接种技术包括哪些？其核心是什么？接种方法很多，最常用接种方法是？
平板划线法、稀释涂布平板法，除此以外还包括斜面接种，穿刺接种等方法
核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度
最常用接种方法是：平板划线法、稀释涂布平板法
26.菌落的概念是什么？
由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体
27.平板划线的原理是什么？
过接种环(工具)在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面
28.划线前灼烧接种环的原因是什么？每次划线之前都要灼烧接种环的原因是什么？划线操作结束后灼烧接种环的原因是什么？
第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
以后每次划线前灼烧：杀死上次划 线结束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末端
划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
29.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高杀死菌种
30.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线末端开始划线？
线条末端细菌的数目比线条起始处要少。每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而减少最终能得到由单个细菌繁殖而成的菌落
31.在平板划线操作时，若划破了培养基将会导致什么结果？
划破处无法形成单个菌落
32.最后一次划线能不能与第一区域相连？
不能，不能达到使细菌分离的目的
33.如果平板上没有菌落生成，可能的原因是什么？如果第一区域有菌落，但之后的区域没有菌落，可能的原因是什么？
平板上没有菌落生成：①可能第一次灼烧灭菌后未冷却，温度太高杀死菌种；②培养基的营养成分可能有缺失。第一区域有菌落，但之后的区域没有菌落：①可能是接种环灼烧灭菌后未冷却，温度太高，杀死了菌种；②可能是第二次划线时未从第一次划线末端开始
34.平板划线法不能用于活菌计数的原因是什么？
原因是菌落连成片，无法计数
35.稀释涂布平板法的原理是什么？操作过程包括哪两步？用何种物质来对菌液进行梯度稀释？
将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的菌落
操作过程包括：系列稀释操作和涂布平板操作
用无菌水对菌液进行梯度稀释
36.在用移液管进行稀释时应该在菌液中吸吹三次，其目的是什么？将涂布器浸在酒精中的主要目的是什么？
使菌液和水充分混匀
为灼烧灭菌做准备
37.如果培养皿中菌落堆叠，可能的原因有哪些？如果菌落分布不均匀呢？
菌落堆叠：①稀释倍数不够；②涂布时滴加菌液过多
菌落分布不均匀：与不均匀涂布有关
38.如何检验培养基的灭菌是否合格？如何排除接种过程是否会被杂菌入侵？如何排除培养过程是否被杂菌污染？
①将接种后的培养基和一个未接种的培养基，都放在37 ℃恒温箱中培养，观察并记录结果
②设置对照接入等量无菌水，都放在37 ℃恒温箱中培养，观察并记录结果
③未接种或接种等量无菌水的培养基(空白对照)上有菌落生长，说明培养基被杂菌污染
39.为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，对于频繁使用菌种，采用什么方法保存？对于需要长期保存的菌种，采用什么方法？
频繁使用的菌种：临时保藏法(4℃冷藏室)
长期保存的菌种：甘油管藏法(-20℃冷冻箱)
40.临时保藏法的操作过程？保藏的温度为多少？该方法的缺点是？
接种到固体斜面培养基上→适宜温度下培养→4℃冰箱中保藏
缺点：临时保藏法保存时间短，菌种容易被污染或产生变异
41.甘油管藏法的温度为多少？灭菌方法为？
－20 ℃ 灭菌方法：高压蒸汽灭菌
